75％乙醇消毒剂微生物限度检查方法研究：可行可靠的新方法
论文，2015年2月，第1卷，第4期，隐藏毒品Z，75%乙醇消毒剂微生物眼部检测方法研究 颜兴焕林、任博 亚东扬子江药业集团广州海瑞药业有限公司广东广州5 10663 [摘要]目的：建立75%乙醇消毒剂微生物限度检查方法。方法：通过膜过滤法，对膜过滤器的选择、冲洗液的种类、冲洗液的冲洗量和冲洗次数等因素进行分析，测定细菌回收率。结果：采用全封闭膜过滤器，然后用pH 7.0氯化钠-蛋白胨缓冲液洗涤5次，试验组活菌回收率大于70%。结论：75%乙醇消毒剂微生物限度检查方法可行、可靠。 [关键词] 75%乙醇消毒剂；微生物限度测试；回收率 R-3 [文档识别码] A doi: 10.3969/j。 issm 1671—5675．2015．4．008 75%a盐林河伯仁河集团海密公司M极限试验方法研究。 ，有限公司，[]ive：目标是 5%。方法：。 OD、过滤器的直径、流体类型和次数均在速率测试中。 ：使用完全过滤，然后5倍pH7.0氯化物时，ia率大于70%。 ：方法是 和 为 75%。 [我75%；微生物限度测试； 75%乙醇消毒液是车间配制的消毒液。主要用于洁净室的清洁和消毒，包括洁净室操作台、设备表面、器具、墙壁、地板等。对洁净室人员的门、窗、手进行清洁消毒，保证生产环境的无菌，控制消毒剂的微生物限量，控制微生物污染水平。《中国药典》中没有75%乙醇消毒剂微生物限度检查的方法。 75%乙醇消毒液的微生物污染水平无法控制。但该消毒剂具有很强的抑菌或杀菌作用。微生物限度检查按常规方法进行。其抑菌、杀菌作用无法消除。为保证实验结果客观、真实、可靠，需消除抑菌、杀菌作用后再进行微生物限度检查。本实验对75%乙醇消毒剂微生物限度检查方法进行了探索，制定了更加客观、简单、可行的方法。 1 实验准备 1.1 实验试剂。 75%乙醇消毒液（公司车间配制）、0.9%氯化钠溶液、pH 7.0氯化钠蛋白胨缓冲液。 1.2 培养基。营养琼脂培养基、营养肉汤培养基、玫瑰红钠琼脂培养基均在实验室制备。 1.3 仪器。鼓风干燥箱LC-233B1、海斯佩克环境设备有限公司、高压蒸汽灭菌器、三洋灭菌柜MLS-3780、生化培养箱、上海跃进医疗器械厂SPX-250、无菌锥形瓶、无菌移液器、无菌2 方法与结果 2.1 菌液制备。分别取金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、枯草芽孢杆菌，置于营养琼脂培养基或营养肉汤培养基中。培养基培养18小时至24小时，白色念珠菌置于玫瑰孟加拉钠琼脂培养基上培养24小时至48小时，黑曲霉置于玫瑰孟加拉钠琼脂培养基上持续 5—7 天。
https://file.zhuangpeitu.com/fileroot1/2021-1/7/f0b21168-5154-4344-9b53-a8b9203a0ddd/f0b21168-5154-4344-9b53-a8b9203a0ddd1.gif
2.2 方法的选择。按《中国药典》>2OLO版第二部附录：具有抗菌活性的供试品的微生物检验方法有四种：培养基稀释法、离心沉淀法、膜过滤法、中和法”J.培养基稀释法用培养基逐渐稀释直至测试样品没有抗菌作用，工作量很大，培养基用量大大增加；离心沉淀法在测试中直接受样品颗粒大小和粘度的影响。溶液及污染微生物的大小和转速影响样品中微生物的回收率，容易导致测试结果不能真实反映测试样品的污染情况；中和法采用适当的中和剂或灭活剂来消除。测试样品的抑制成分 上述方法均不合适。采用膜过滤法测定75%乙醇消毒剂的微生物限度。 2.3 供试品溶液的制备 按《中国药典》附录XJ关于微生物限度检查方法的规定，常用的供试品溶液制备方法为：将供试品10ml用pH 7.0氯化钠-蛋白胨缓冲液稀释至100ml，混匀制成1:10供试品溶液。膜过滤法的每片膜应含有1ml测试样品，故取1：1。 J过滤10ml试验液。2.4滤膜的选择。膜过滤法采用大采样体积收集细菌的方法。作者简介：颜星环(1986)，女，广东茂名人，本科，专业。从事药物检测，邮箱：@。
具有代表性，不易错过，仪器操作简单；采用全封闭过滤系统，避免操作过程中受到外源细菌污染，对检测结果的可信度影响较小。 75%乙醇属于有机溶剂，故选用杭州某生物技术装备有限公司生产的型号为J的全封闭式滤膜过滤器，滤膜材料为N66。 2.5冲洗液种类的选择、冲洗情况的检查体积和冲洗时间。吸取试液并过滤，用冲洗液冲洗滤膜，将各菌悬液（≤）加入最后一次冲洗液中，过滤干燥，取出滤膜，贴于培养基（营养琼脂培养基）上），有细菌的一面朝上。 /玫瑰红钠琼脂）平皿，每种菌悬液平行制备2个平皿，得到试验组；不加试液，同上操作，得到菌液群；不加菌悬液，吸取试液过滤，用冲洗液冲洗滤膜，晾干，取出滤膜正面朝上贴在培养基（营养琼脂培养基/玫瑰红钠琼脂培养基）平板上，平行制备2块板，取供试品溶液对照组。计算金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、枯草芽孢杆菌回收率时，采用3天的计数结果；计算白色念珠菌回收率时，采用5天的计数结果。 3 结果 试验组回收率（%）=（试验组平均菌落数-试验对照组平均菌落数）/菌液组平均菌落数×100%。结果如表1和表2所示。
https://img10.360buyimg.com/n1/jfs/t1/75372/17/17433/110227/6270ec8dEc6a6dde6/9d53246a0aed4386.jpg
两种不同的常用冲洗溶液是 pH 7.0 氯化钠-蛋白胨缓冲液和 0.9% 氯化钠溶液。因此，本试验采用上述确定的试验品浓度和膜过滤器。在常用冲洗量/冲洗次数（3次冲洗，每次100M）情况下，对两种不同冲洗液进行3次测试，比较两种冲洗液稀释液对照组的回收率，pH7.0氯化钠-蛋白胨缓冲液高于0.9%氯化钠溶液，因此决定选择pH 7.0氯化钠-蛋白胨缓冲液作为冲洗液。选择上述确定的供试品浓度、膜过滤器和冲洗液，对冲洗量和冲洗次数进行3次测试。从以上数据可以看出，3种冲洗方式的测试组细菌计数回收率均未达到70%。 ，8次洗涤方法，试验组细菌计数回收率大于70%。膜过滤法应使用较少的用量和洗涤次数，故选择500ml/5次洗涤法。表1 使用两种不同冲洗液进行的三项测试的回收率测量结果（%）（续第12页）
页:
[1]